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作为试剂用于测定化合物浓度或酶活力的酶称为工具酶。

对于底物或产物不能直接测定或难于准确测定的酶促反应，采用酶耦联法测定。

1.NAD(P)十或NAD(P)H偶联的脱氢酶及其指示反应。

2.偶联H2O2的工具酶及其指示反应

有些酶作用于底物时，可使其氧化产生H2O2，在POD的作用下使色素原氧化显色进行测定。

(1)使单一的色素原显色：色素原是一种无色的色素前身，在过氧化物酶(POD)存在下被H2O2氧化后可生成有色的色素。如邻联茴香胺(ODA)。

(2)使成对的色素原显色：必须有两个色素原共同存在，再在过氧化物酶(POD)的催化下生成色素。如酚和4-氨基安替比林作用，生成红色色素。

(3)发光反应：H2O2也可用化学发光反应来监测。

(六)标本采集要点及酶活性表示法

1.部分分析前因素对酶活性测定的干扰

1)溶血：部分酶在红细胞膜或红细胞内的浓度远高于细胞外，少量红细胞的破坏就可能引起血清中酶明显升高。

2)抗凝剂：有些抗凝剂是金属螯合剂，可以抑制需要金属离子的酶。如草酸盐、柠檬酸盐和EDTA等可抑制需Ca2+的AMY，也可抑制需Mg2+的CK，草酸盐可以抑制催化氧化还原的酶，EDTA还能抑制ALP，这些抗凝剂分离的血浆一般不宜做酶活性测定。肝素可使γ-GT升高，使AMY下降，需加注意。

3)标本储存温度：

血清白蛋白对酶蛋白有稳定作用，如无细菌污染，某些酶(如AST、γ-GT和ALP等)存在于白蛋白中可在室温保存1～3天，而对活性影响不大。

有些酶极不稳定，如血清前列腺ACP，在37℃放置1小时，活性可下降50%。大部分酶在低温中可稳定较长时间，标本如在离体后不能及时测定，应及时分离血清或血浆并置于冰箱冷藏。

2.标本采集要点

酶测定之前，标本要经过采集、分离血清和储存等过程，酶在血中是处于动态变化过程，血液离开体内后，会有一定变化。其中任何一个阶段处理不当，都有可能引起测定值变化。

(1)不能溶血：因大多数酶在血细胞中的含量比在血浆中高得多。如LDH高150倍，ALT高7倍。

(2)及时分离血细胞：防止血细胞内酶大量进入血清;采血后1～2小时实验室必须及时离心，分离血清。

(3)及时测定：防止酶蛋白变性，分离血清如不能及时测定，应放冰箱保存。

(4)尽量用血清标本：防止某些抗凝剂对酶的抑制作用(除非测定与凝血或纤溶有关的酶)。

(5)有些标本不能冷冻：有的酶在低温下不稳定。

有些酶如LD在融冻时被破坏，LD在低温反而不如室温稳定，即所谓的“冷变性”。

3.酶活性表示法

酶活性的大小通常以酶单位数表示。

酶的国际单位：在实验规定的条件下(温度、最适pH、最适底物浓度时)，在1分钟内催化1μmol底物发生反应所需的酶量为1个酶活力国际单位(U)。

能够真正代表酶活性大小的是酶促反应初速度。

延伸阅读：基因工程的关键技术是脱氧核糖核酸的连接和重组，在此过程中一些酶起着至关重要的作用，这些酶统称为基因工程工具酶。工具酶种类繁多、功能各异，主要包括限制酶、聚合酶、连接酶、修饰酶和核酸酶五大类。其中，以限制性核酸内切酶和DNA连接酶在分子克隆中的作用最为突出。这些酶具有特异性的序列识别能力以及高效的生物催化活性，在一定的条件下可以对核酸分子进行切割、连接、扩增以及修饰等，同时工具酶的反应条件温和且具有出色的生物相容性。基于这些优势，工具酶被广泛地应用于核酸、蛋白质和小分子等生物活性分子的分析检测。