脑脊液穿刺部位有腰椎穿刺、小脑延髓池穿刺等，其中腰椎穿刺简单易行且危险性小。

穿刺术通常由临床医师进行。

标本抽出后，按先后顺序分别收集于3支无菌试管中，第1管做细菌学检查，第2管做生化检查，第3管做细胞计数。

采集的脑脊液标本应尽量避免凝固和混入血液。标本采集后应立即送检。