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Nat Com:CRISPR-Cas9技术制备配对gRNA文库

摘要 : 8月17日Nature Communications上发表纪念斯隆-凯特琳癌症中心Andrea Ventura和Joana A. Vidigal共同发现一种简单快捷制备文库的研究论文,论文指该方法可以快速有效的将配对gRNA克隆到表达载体上,用于体内和体外的功能筛选。

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 8月17日Nature Communications上发表纪念斯隆-凯特琳癌症中心Andrea Ventura和Joana A. Vidigal共同发现一种简单快捷制备文库的研究论文,论文指该方法可以快速有效的将配对gRNA克隆到表达载体上,用于体内和体外的功能筛选。

CRISPR-Cas9现在是炙手可热的基因组编辑工具。研究人员开发了一个快速制备配对gRNA文库的有效方法,大大拓展了CRIPSR在功能筛选方面的应用。该方法可以将寡核苷酸池中的一对gRNA克隆到任意CRISPR 表达载体上,还可以确保两个gRNA使用独立的启动子。研究表明,一个慢病毒载体上的两个gRNA不适合使用相同的启动子。研究人员为此构建了新型慢病毒载体,搭载一个人类U6启动子和一个经过改良的鼠类U6启动子。这项研究为人们提供了一个简单、快速又便宜的配对gRNA文库制备方法,进一步展示了CRISPR技术在功能基因组学研究中的额外应用。

原文链接:

Rapid and efficient one-step generation of paired gRNA CRISPR-Cas9 libraries

原文摘要:

The CRISPR-Cas9 system is a powerful tool to edit eukaryotic genomes that has recently been adapted for functional screens. Several of its applications—including the disruption of genes usingCas9-nickase and the generation of large deletions—require co-expression of two distinct guide RNAs (gRNAs). However, the lack of experimental approaches to generate pools of paired gRNA vectors prevents these applications from being scalable. Here we report a simple, inexpensive, one-step method that allows for the rapid and efficient cloning of gRNA pairs into expression vectors. We show that this method can be used to generate pooled libraries and is therefore suitable for in vivoand in vitro functional screens.

来源: Nature Communications 浏览次数:0

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